Wie funktioniert die HPLC?

Wie funktioniert die HPLC?

Wie funktioniert die HPLC? Die HPLC ist im Grunde eine technisch optimierte Säulenchromatographie. Bei diesem Trennverfahren drückt eine Pumpe kontinuierlich mit 50 – 400 bar den Eluenten, also die mobile Phase, möglichst pulsationsarm durch die Chromatographiesäule, die mit der festen stationären Phase gefüllt ist.

Was bedeutet die Abkürzung HPLC?

Die Abkürzung HPLC steht für High Performance Liquid Chromatography (auf deutsch: Hochleistungsflüssigkeitschromatographie) und stellt eine analytische Methode in der Chemie dar. Ein HPLC-Gerät umfasst unter anderm ein Vorratsgefäß, HPLC Pumpe(n), Mischkammer, Proben-Injektor, Säule, Detektor und Abfallgefäß.

Wie funktioniert ein Ionenchromatograph?

Bei der Ionenchromatographie handelt es sich um eine analytische Methode zur Trennung von geladenen Teilchen, sie beruht auf drei verschiedenen Trennungsmechanismen: der Ionenaustausch, die Ionenpaarbildung und der Ionenausschluss.

Was heißt Isokratisch?

Als isokratisch bezeichnet man Eluiermittelgemische, deren Zusammensetzung während der chromatographischen Trennung gleich bleibt. Als Gradient bezeichnet man Eluiermittelgemische, deren Zusammensetzung während der chromatographischen Trennung geändert wird; dabei ändert sich die Eluier-Eigenschaft und der Druck.

Wie funktioniert ein RI Detektor?

Der RI-Detektor registriert Verbindungen, die einen anderen Brechungsindex als die reine mobile Phase aufweisen. Es wird also die Änderung des Brechungsindex relativ zum Eluenten aufgezeichnet (positive und negative Peaks sind möglich).

Warum gradientenelution?

Mit der Gradientenelution ändert sich die Zusammensetzung der mobilen Phase (Fliessmittles) während des Trennvorgangs. Die Gradientenelution wird vorteilhaft in der Proteinreinigung eingesetzt: Auftrennung von komplexen biologischen Proben. Trennung von Gemischen mit bekannten Eigenschaften.

Was ist eine HPLC-Anlage?

Jeder Eluent wird von einer Pumpe gefördert und die Mischung erfolgt auf der Druckseite der Anlage. Dazu wird eine Mischkammer verwendet. Eine solche Anlage wird als Hochdruckgradienten HPLC bezeichnet. Bei der Förderung des Eluenten durch die HPLC-Anlage baut sich Druck auf. Den Hauptanteil bewirkt hierbei die Säule.

Welche Detektionstechniken werden in der HPLC eingesetzt?

In der HPLC werden die angeführten Detektionstechniken eingesetzt. Die Wahl des Detektors richtet sich meist nach den zu analysierenden Komponenten. So kann ein elektroanalytischer Detektor nur für elektrochemisch aktive Substanzen eingesetzt werden, und ein RI-Detektor wird meist bei Zuckeranalysen verwendet.

Welche Parameter sind wichtig bei HPLC-Säulen?

Weitere Kennwerte bei HPLC-Säulen Wichtige Parameter bei der Säulenauswahl sind Partikeldurchesser, Porengröße, Oberfläche und die funktionelle Gruppe und Dicke der Oberflächenbelegung der Trennsäule. Gleichmäßige und sehr kleine Partikel bilden die Grundlage der stationären Phase.

Welche Trennmethoden benötigt man für eine HPLC-Analyse?

Die derzeit am häufigsten eingesetzte Trennmethode ist die Reversed Phase. Ionenaustausch-, Ionenpaarbildung-, Ausschluss- und Affinitätschromatographie finden mehr in speziellen Trennproblematiken ihre Anwendung. Welche Geräte / Bauteile benötigt man für eine HPLC-Analyse?

Wo wird HPLC verwendet?

HPLC wird nicht ausschließlich zu analytischen Zwecken eingesetzt sondern auch in der chemischen Industrie, um ein Produkt (z. B. Proteine) von Verunreinigungen zu trennen. Hierbei kommen Säulen mit bis zu einem Meter Durchmesser zum Einsatz.

Was ist HPLC Wasser?

Die am häufigsten verwendeten LC-Methoden sind Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und Ionenchromatographie (IC). Die Flüssigchromatographie ist eines der leistungsfähigsten Instrumente im Analytik-Labor. Sie wird sehr häufig zur Trennung und Analyse aller Arten von gemischten Verbindungen eingesetzt.

Was ist der Retentionsfaktor?

Der Retentionsfaktor (Rf-Wert) ist mit der Retentionszeit in der Säulenchromatographie vergleichbar und ist für jede Verbindung charakteristisch, aber vom chromatographischen System abhängig. Er lässt also eine qualitative Auswertung des Chromatogramms zu (gilt aber nicht als Beweis für eine Identifizierung).

Welche Detektoren gibt es?

Es gibt drei Haupttypen von Detektoren, die verschiedene Arten von Signalen aufzeichnen.

• Zähler . Die Aktivität oder Intensität der Strahlung wird in Zählungen pro Sekunde (cps) gemessen.
• Strahlungsspektrometer . Spektrometer sind Geräte zur Messung der spektralen Leistungsverteilung einer Quelle.
• Dosimeter .

Was ist eine Chromatographie einfach erklärt?

Chromatographie (griechisch, zu deutsch Farbenschreiben) wird in der Chemie ein Verfahren genannt, das die Auftrennung eines Stoffgemisches durch unterschiedliche Verteilung seiner Einzelbestandteile zwischen einer stationären und einer mobilen Phase erlaubt.

Wie kann die RPC eingesetzt werden?

Die RPC bietet den Vorteil, dass sie für ein breites Spektrum an Analysen eingesetzt werden kann. Dazu zählen neben der Analytik von polaren und apolaren Substanzen auch die von Analyten, die als Ionen vorliegen. Die Steuerung der Trennung erfolgt in diesem Fall über die entsprechende Auswahl der mobilen Phase.

Wie geht es mit der HPLC-Säule?

Über eine separate Kapillare, der sogenannten Probenschleife, führt der Injektor über ein Ventil die zu analysierende Probe zu, welche vom Laufmittelstrom mitgerissen wird. Das Laufmittel samt Probe fließt nun weiter und trifft auf die HPLC-Säule (D).

Wie groß ist die Partikelgröße bei der HPLC?

Im Vergleich zur normalen Flüssigkeitschromatographie im Niederdruckbereich ist die Teilchengröße der stationären Phase bei der HPLC mit < 10 μm erheblich kleiner. Je kleiner die Partikel sind, desto höher ist die Trennleistung.