Wie wird eine Gelelektrophorese durchgefuhrt?

Wie wird eine Gelelektrophorese durchgeführt?

Gelelektrophorese ist eine analytische Methode der Chemie und Molekularbiologie, um verschiedene Arten von Molekülen zu trennen. Dabei wandert eine Mischung aus zu trennenden Molekülen unter Einfluss eines elektrischen Felds (siehe dazu: Elektrophorese) durch ein Gel, welches in einer ionischen Pufferlösung liegt.

Warum dürfen die beiden Primer nicht komplementär zueinander sein?

Die Primer lagern sich dann auch an Bereiche an, die nicht ganz komplementär zu ihrer Sequenz sind. So kommt es zu einer Vermehrung von ungewünschten Artefakten, die auch das Endergebnis verfälschen.

Wie ist die Gel-Matrix aufgebaut?

Die Apparatur der Gelelektrophorese ist aus einer sogenannten Gel-Matrix aufgebaut, durch die die Moleküle wandern können. In der Gel-Matrix befinden sich Poren, die für die Moleküle wie eine Art Sieb wirken. Die Größe der Poren unterscheidet sich dabei je nachdem, welches Gel du verwendest.

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Wie funktioniert die DNA-Färbung bei UV-Licht?

Die DNA-Färbung erfolgt mit Ethidiumbromid ( EtBr ), welches aufgrund seiner planaren Struktur zwischen den Basen der DNA interkaliert. Bei Bestrahlung mit UV-Licht fluoresziert Ethidiumbromid im sichbaren Bereich rosa bis lila, so daß die aufgetrennte DNA bei Auflage des gefärbten Gels unter eine UV-Lampe als rosa bis lila Banden sichtbar wird.

Wie kann man eine DNA-Menge in einem Gel sichtbar machen?

Durch Anfärben mit Ethidiumbromid kann eine DNA-Menge von 5 ng in einem Gel noch sichtbar gemacht werden. Während sich bei der Ethidiumbromid-Färbung im Gelbild weiße Banden auf schwarzem Grund zeigen, sind bei der Färbung mit dem blauen Farbstoff Azu-B-chlorid, der alternativ verwendet wird, im Gelbild schwarze Banden auf hellem Grund zu sehen.

Warum ist DNA ungünstig für unser Auge?

Größere Moleküle werden durch die Poren der Netzstruktur abgebremst und wandern dadurch langsamer im elektrischen Feld als kleinere Moleküle. DNA trägt eine negative Ladung. DNA hat die ungünstige Eigenschaft, dass sie für unser Auge nicht zu erkennen ist.

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