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Was ist ein ladepuffer?
Ein Probenpuffer (auch Ladepuffer, englisch sample buffer, loading buffer) bezeichnet in der Biochemie eine Lösung mit gepufferten pH-Wert, der vor einer Gelelektrophorese den Proben zugesetzt wird.
Was ist ein laufpuffer?
Ein Elektrophoresepuffer (umgangssprachlich auch Laufpuffer) ist ein Puffer, der zu einer Elektrophorese verwendet wird.
Warum wandern Proteine zur Anode?
Da sich gegensätzliche Ladungen anziehen, wandern die negativ geladenen Moleküle (= Anionen) unter Einfluss des elektrischen Feldes in Richtung der Anode (positiv geladen). Die positiv geladenen Moleküle (= Kationen) wandern entsprechend zur Kathode (negativ geladen).
Wie bindet SDS an Protein?
SDS bindet in einem stabilen Verhältnis an die Aminosäure-Kette, so dass die Ladung des Moleküls proportional zur Masse ist. Zusätzlich wird ein Reduktionsmittel, in der Regel Mercaptoethanol, zugefügt, um Disulfidbrücken aufzulösen. In der Folge ist das Protein nahezu vollständig denaturiert.
Was macht die SDS-Page?
SDS-PAGE wird in der Analyse von Proteinen verwendet. Als Trennmedium bei dieser Art der Elektrophorese dient ein Gel auf Polyacrylamidbasis. Zusätzlich kommt SDS (Natriumdodecylsulfat) zum Einsatz. Dieses anionische Tensid (Detergens) überdeckt die Eigenladungen von Proteinen.
Warum sind serumproteine negativ geladen?
Der isoelektrische Punkt der meisten Serumproteine liegt im schwach sauren Bereich (pH 4-5). Da ungeladene Moleküle in der Elektrophorese nicht wandern, erfolgt die Auftrennung der Serumproteine im schwach alkalischen Bereich bei pH 8.6, so dass die meisten Proteine negativ geladen sind (Protein-Anionen).
Welche Moleküle sind als Puffer geeignet?
Solche Lösungen enthalten eine Mischung aus einer schwachen Säure und ihrer konjugierten Base (oder des jeweiligen Salzes). Auch Ampholyte und bifunktionale Moleküle können als Puffer dienen. Der den pH-Wert bestimmende Faktor ist das Verhältnis bzw. das Protolyse-Gleichgewicht des Pufferpaares.
Was geschieht bei einem geschlossenen Puffersystem?
Bei einem geschlossenen Puffersystem (z.B. Essigsäure/Acetat-Puffer) werden die bei einer chemischen Reaktion entstehenden Protonen (H + ) oder Hydroxyl-Ionen (OH − ) von der Puffersubstanz abgefangen. Sie reagieren zu der entsprechenden konjugierten Säure oder Base des Puffers und verbleiben demnach in der Lösung.
Wie fängt eine Pufferlösung ab?
Eine Pufferlösung fängt im Idealfall die zugegebene Säure oder Base komplett ab, sodass sich der pH-Wert nicht ändert. Solche Lösungen enthalten eine Mischung aus einer schwachen Säure und ihrer konjugierten Base (oder des jeweiligen Salzes).
Was ist ein reduzierender Probenpuffer?
Der Puffer ist analog zum Laufpuffer der SDS-PAGE mit TRIS (250 mM Endkonzentration), Glycin und Natriumlaurylsulfat zusammengesetzt. Ein reduzierender Probenpuffer enthält darüber hinaus zur Spaltung von Disulfidbrücken Mercaptoethanol (5 \% V/V), Dithiothreitol (10 mM) oder Dithioerythrit.