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Was wird für eine erfolgreiche DNA Sequenzierung benötigt?
Der erfolgreiche Einbau eines Nukleotids wird durch ein ausgeklügeltes Enzymsystem unter Beteiligung einer Luziferase in einen Lichtblitz umgesetzt und von einem Detektor erfasst. Die zu sequenzierende DNA dient als Matrizenstrang und liegt einzelsträngig vor.
Ist DNA Sequenzierung Gelelektrophorese?
Die Methode von Allan Maxam und Walter Gilbert von 1977 beruht auf der basenspezifischen chemischen Spaltung der DNA durch geeignete Reagenzien und anschließender Auftrennung der Fragmente durch Gelelektrophorese. Durch Vergleich der vier Ansätze auf dem Gel lässt sich die Sequenz der DNA ablesen.
Was ist eine DNA-Sequenzierung?
Die DNA-Sequenzierung ist ein molekularbiologisches Analyseverfahren, das die Nukleotidabfolge der DNA bestimmt und so der Entschlüsselung der Erbinformation (Genom oder Gene) von Organismen dient.
Was sind die klassischen Verfahren zur Sequenzierung?
Beginnen wir mit den klassischen Verfahren zur Sequenzierung, die beide unabhängig voneinander und fast zeitgleich (1975 und 1977) entwickelt wurden: die Methode von Maxam und Gilbert und die Sanger Sequenzierung . Das Grundprinzip der Maxam-Gilbert-Methode ist es, eine chemische Spaltung der zu untersuchenden DNA zu veranlassen.
Wie teilt man den sequenzierungsansatz in vier gleiche Teile?
Teilt man den Sequenzierungsansatz in vier gleiche Teil und gibt 2’,3’- Didesoxyribonukleosid-Triphosphate hinzu, die keine freie Hydroxylgruppe mehr besitzen, kommt es zu einem Kettenabbruch, der sequenzspezifisch ist. Der Abbruch ist aufgrund der Komplementarität ebenfalls basenspezifisch, kann jedoch an jeder beliebigen Position erfolgen.
Wie lange dauert die Sequenzierung der zweiten Generation?
Damit ist es nun möglich, das komplette menschliche Genom in etwa 8 Tagen zu sequenzieren. Die entsprechenden Verfahren werden als Sequenzierung der zweiten Generation ( engl. second generation sequencing) bezeichnet. Verschiedene Firmen haben Verfahren mit unterschiedlichen Vor- und Nachteilen entwickelt.