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Was versteht man unter Blotting?
Als Blotting oder Blotten bezeichnet man in der Molekularbiologie ein Verfahren zum Transfer von Molekülen wie DNA, RNA oder Proteine auf eine Membran. Stark entwickelten Blotting-Techniken für RNA als Northern Blot und für Proteine als Western Blot bezeichnet.
Warum Blotting?
Im Bereich der Medizin dient das Western Blotting dem Nachweis diagnostisch interessanter Proteine, so zum Beispiel von Antikörpern im Serum, welche für das Vorliegen bestimmter Infektionskrankheiten typisch sein können.
Wie funktioniert Blotting?
Southern Blotting ist ein molekularbiologisches und biotechnologisches Verfahren, welches zur Analyse von DNA-Fragmenten benötigt wird. Dieses Verfahren ermöglicht so die Identifikation einer gesuchten DNA-Sequenz innerhalb der Erbsubstanz. Bei dieser Methode ist keine weitere Entschlüsselung notwendig.
Warum macht man einen Western Blot?
Der Western Blot stellt ein Verfahren zum Nachweis von Proteinen in einem Proteingemisch (z.B. Zelllysat) dar.
Wie funktioniert Southern Blotting?
Er funktioniert prinzipiell wie der Kapillar-Blot. Statt des saugfähigen Materials zieht hier allerdings ein Unterdruck die Flüssigkeit durch Gel und Membran. Der Vakuum-Blot ist schneller und sparsamer, was die Salzlösung angeht. Beim Elektroblot wird die negative Ladung der DNA genutzt.
Wie wird eine gensonde hergestellt?
DNA-Sonden werden durch Phosphoramidit-Synthese, Random Priming, Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Nick translation, Tailing oder Phosphorylierung erzeugt. RNA-Sonden, auch Ribosonden (engl. riboprobe) genannt, werden durch In-vitro-Transkription hergestellt.
Wie erkennt man Gene?
Ein gewünschtes Gen wird mit Hilfe von Gensonden ausfindig gemacht. Diese Gensonden sind kurze, radioaktive DNA-Stücke, die komplenentär zu dem gewünschten Gen sind und sich deshalb anlagern können. Das ist der Vorgang zur Identifizierung eines Gens: Zuerst wird eine mit Phagen aus der Genbibliothek infizierte E.